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哺乳動(dòng)物細(xì)胞的RNAi技術(shù)策略目前RNAi技術(shù)已經(jīng)進(jìn)入了生物科學(xué)研究的許多領(lǐng)域，成為了一種主要的生物學(xué)研究工具，發(fā)展得相當(dāng)迅速，并受到了此次諾貝爾獎(jiǎng)評(píng)審委員會(huì)的青睞，獲得2006年諾貝爾獎(jiǎng)醫(yī)學(xué)/生理獎(jiǎng)。然而這一才歷經(jīng)十個(gè)年頭的技術(shù)依然對(duì)于許多研究人員來(lái)說(shuō)還是很陌生的，以下是有關(guān)RNAi技術(shù)在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中應(yīng)用的具體設(shè)計(jì)策略，主要來(lái)自于《遺傳》雜志2005年“RNA干涉（RNAi）技術(shù)應(yīng)用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的研究策略”，希望能給從事或者準(zhǔn)備從事RNAi相關(guān)實(shí)驗(yàn)的研究人員以幫助。哺乳...

生物素-親和素系統(tǒng)（BAS）ELISA和免疫組化技術(shù)20世紀(jì)70年代后期在免疫酶技術(shù)中利用生物素-親和素系統(tǒng)（biotin-avidinsystem，BAS）標(biāo)記抗體發(fā)展了又一種新型生物反應(yīng)放大技術(shù)，即BAS-ELISA技術(shù)，它使用生物素-親和素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物作為指示劑，組成一新的生物放大系統(tǒng)進(jìn)一步提高檢測(cè)的敏感度。生物素（biotin）是廣泛分布于動(dòng)植物體內(nèi)的一種生長(zhǎng)因子，又稱輔酶R或維生素H。親和素（avidin）是卵白及某些微生物中的一種蛋白質(zhì)，由4個(gè)亞單位組成。二...

PCR-ELISA法診斷禽流感PCR-ELISA是將一步RT-PCR技術(shù)與酶聯(lián)免疫吸附法相結(jié)合，檢測(cè)病毒的一項(xiàng)診斷技術(shù)。PCR的一對(duì)引物中，其中一個(gè)用生物素標(biāo)記、另一個(gè)用地高辛標(biāo)記，在酶標(biāo)微孔板上用親和素包被，PCR擴(kuò)增后純化片段加入微孔板中。此時(shí)，微孔板上包被的親和素將與生物素標(biāo)記引物上的生物素特異性結(jié)合而捕捉了PCR片段，然后在微IL板中加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗地高辛抗體，該抗體將與地高辛標(biāo)記引物上的地高辛結(jié)合，從而形成親和素-生物素-PCR片段-地高辛-地高辛抗體-辣...

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）診斷豬囊尾蚴病病目前實(shí)驗(yàn)室開(kāi)發(fā)的新型檢測(cè)方法主要是以ELISA及改良的ELISA為主。分別用5種不同改良的ELISA平行檢測(cè)囊蟲(chóng)抗體：ABC-ELISA、經(jīng)典ELISA、SPA-ELISA、快速法ELISA和BAELISA，試驗(yàn)結(jié)果差異不顯著，說(shuō)明方法學(xué)的選擇主要依據(jù)習(xí)慣和試驗(yàn)的目的。N．S．Odashima（2002）用ELISA法診斷不同的患者群血清中抗體的種類，發(fā)現(xiàn)ELISA—lgG敏感度zui高，分別達(dá)到88．5％和93．2％，這說(shuō)明該方...

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定ELISA操作中標(biāo)本的收集用于ELISA測(cè)定的臨床標(biāo)本zui為常用的是血清（漿），有時(shí)因?yàn)樘囟ǖ臋z測(cè)目的，也用到唾液、腦脊液、尿液、糞便等標(biāo)本。目前使用血清（漿）標(biāo)本測(cè)定的標(biāo)志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物、激素、特種蛋白、細(xì)胞因子和治療藥物等。對(duì)用于激素和治療藥物測(cè)定的血清標(biāo)本的收集，要注意收集時(shí)間甚或體位有可能會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生影響。如可的松在早晨4：00—6：00之間，會(huì)有一峰值出現(xiàn)；生長(zhǎng)激素、促黃體激素（LH）和促卵泡激素（FSH）均以陣發(fā)...

酶標(biāo)抗體的質(zhì)量鑒定與保存1．酶活性和抗體效價(jià)測(cè)定采用雙向免疫擴(kuò)散法（稀釋抗體）和DAB-H2O2顯色反應(yīng)檢測(cè)結(jié)合物中抗體效價(jià)和免疫沉淀線中的酶促反應(yīng)。2．酶量和IgG量酶量（mg/ml）=OD403′0.4IgG量（mg/ml）=（OD280-OD402′0.42）′0.94′0.62其中，0.42為酶蛋白本身（0.3）及結(jié)合戊二醛后增加的OD值，0.94為抗體蛋白與醛化酶結(jié)合后，OD280約增加6%，故乘以0.94。兔IgG的OD280=1.0時(shí)為0.62.過(guò)碘酸鈉標(biāo)記法I...